目前我国水质（粪）大肠菌群的标准检测方法
有多管发酵法和滤膜法，酶底物法自2006年列入
《生活饮用水标准检验方法》以来，便受到了检测行
业内的普遍关注[1～2]，相对于传统的多管发酵法，该
方法具有操作简便，检测时间短，染菌几率低等优
点[3]，且大量文献证实多管发酵法与酶底物法在检
测粪大肠菌群结果上没有显著性差异，方法没有区
别，效果相同[4～8]。甚至有学者提出将酶底物法代替
多管发酵法列为标准方法，并且列为优选标准检验
方法[9]。
然而由于酶底物法商品化培养基及其耗材的
价格昂贵，阻碍了其发展[10]。《生活饮用水标准检验
方法》中对酶底物法培养基的选择规定“可选市售
商品化制品”同时提供了培养基的基本成分：硫酸
铵、硫酸锰等13种成分供实验人员自己配制[11]，但是
由于该培养基实验室配制的操作性不强和商品化
培养基的便利性，多数实验人员仍倾向购买商品化
试剂，有行业人士提出酶底物法试剂的国产化有利
于该方法的推广和发展[12]。
近年来国内出现了价格低廉的同类制品，同为
酶底物法51孔和97孔MPN（*可能数，most probable
number）计数原理，本项试验选取了国产商品化的
colitech试剂与进口colilert试剂及其各自配套制品
（100mL取样瓶，51孔和97孔定量盘） 检验水中总大
肠菌群和粪大肠菌群比较。
1 材料与方法
1.1 材料
国产colitech试剂、100mL无菌取样瓶（含1.5%
的固体硫代硫酸钠），51孔和97孔定量盘、2010A型
程控定量封口机均由西安立科环保科技有限公司
提供；进口colilert试剂、100mL无菌取样瓶（含1.5%
的固体硫代硫酸钠）、51孔和97孔定量盘、2009D型
定量程控封口机均由美国爱德士公司提供。其它试
剂均按照标准检验方法配制。标准菌种购于国家标
准物质中心。
1.2 方法
用100mL无菌取样瓶量取100mL水样，加入酶
底物法试剂并摇匀溶解，倒入51孔或97孔定量盘，
赶出气泡后用封口机封口，置于37℃±0.1℃或44.5℃
±0.5℃培养箱中培养24h后以显黄色为阳性原则判
读结果，并对照相应51孔或97孔MPN表计数。
两种酶底物法监测水中（粪）大肠菌群商品化制品的比较
张会强马文鹏刘敏周弛张秦铭张佳音梁卫东张宇
（陕西省环境监测中心站陕西西安710051）
摘要：比较了进口colilert试剂和国产colitech试剂及其各自配套制品对水中（粪）大肠菌群的检测，包括总大肠菌群和粪
大肠菌群。分别使用同为酶底物法的两种制品检测地表水、地下水、水源水、生活饮用水及污水水样，比较了两种制品用于水中
（粪）大肠菌群检测结果的一致性，同时验证了两种制品的无菌性和培养基的选择性。试验结果表明，进口colilert试剂和国产
colitech试剂及其各自配套制品于水中（粪）大肠菌群检测结果具有一致性，培养基具有很好的选择性。
关键词：酶底物法总大肠菌群粪大肠菌群酶底物colitech试剂
中图分类号：X172 文献标识码：A 文章编号：（G）01-0079（2014）-01-22-24-03
收稿日期：2013-11-01
作者简介：张会强（1980-），男，河北晋州人，工程师，硕士，主要从事
微生物检测与环境监测工作。
分析测试（22~24）2 结果
2.1 无菌性测试
随机抽取20套colitech和colilert制品（包括试剂、
100mL无菌取样瓶、51孔和97孔定量盘各10个），对
经121℃高压蒸汽**20min 的无菌生理盐水
（0.9%，w/v，氯化钠溶液）进行空白试验，培养结果均
为“阴性”，说明两种制品均符合无菌要求。
2.2 培养基性能测试
随机抽取20套colitech和colilert试剂，按照培养
基阳性和阴性对照培养检查试验要求[13]，分别挑取
阳性和阴性标准质控菌株接种于事先溶解的两种
试剂中。经阳性菌株培养试验，结果均呈“阳性”；而
阴性菌株培养试验，结果呈“阴性”，说明两种培养
基均符合总大肠菌群和粪大肠菌群检测要求。选取
的有证标准菌株及检验结果如表1。
表1 标准菌株检验
编号菌株名称菌株编号总大肠菌群粪大肠菌群
培养温度： 培养温度：
37℃±1℃ 44.5℃±0.5℃
1 大肠埃希氏菌ATCC 25922 阳性阳性
2 金黄色葡萄球菌ATCC 25923 阴性/
3 产气肠杆菌CCTCC AB200052 阳性阴性
4 铜绿假单胞菌CGMCC 1.2387 阴性/
5 粪链球菌ATCC 29212 / 阴性
2.3 检验结果比较
分别利用进口colilert试剂和国产colitech试剂对
88份水样（含地表水、地下水、水源水、生活污水）进
行总大肠菌群和粪大肠菌群的检验，结果分别如图
1和图2。
1g（mpn/L）
样品编号
图1 进口colilert试剂和国产colitech
试剂检测总大肠菌群的比对数据
对两组数据进行配对t 检验，配对样本t 检验
前提条件是数据符合正态分布，因此需要对数据进
行对数处理后（lg（MPN/L））利用SPSS18.0统计软件
进行配对t 检验[14]，分析结果见表2。
表2 总大肠菌群检测数据配对t检验结果
成对差分
均标准均值的标准
值差误差
colitech
试剂
-colilert
试剂
差分的95%
置信区间
t df Sig.(双侧) 下限上限
-.001261 .172333 .018371 -.037775 .035253 -.06987 .945
1g（mpn/L）
样品编号
图2 进口colilert试剂和国产colitech
试剂检测粪大肠菌群的比对数据
按照上述的数据处理方法，利用SPSS18.0统计
软件对两组粪大肠菌群的结果进行配对t 检验，结
果见表3。
表3 粪大肠菌群检测数据配对t检验结果
成对差分
均标准均值的标准
值差误差
colitech
试剂
-colilert
试剂
差分的95%
置信区间
t df Sig.(双侧) 下限上限
-.0102841 .1898333 .0202363 -.0299377 .0505059 -.508 87 .613
两种试剂对总大肠菌群检测数据配对t检验结
果显示，其P-值大于显著性水平，即：Sig.=0.945>
0.05，两种试剂对粪大肠菌群监测数据配对t检验结
果显示，其P-值大于显著性水平，即：Sig.=0.613>
0.05，因此进口colilert试剂和国产colitech试剂对总
大肠菌群和粪大肠菌群的检测结果没有显著差异。
2.4 生活饮用水（自来水）的检验
平行选取10份实验室自来水进行粪大肠菌群
的检验，由于自来水为加氯水样，应使用100mL取样
瓶中的固体硫代硫酸钠去除自来水中的余氯后进
行检验，为了检验余氯的去除效果，其中6～10号水
样经去除余氯后进行了加标试验，结果如表4。
表4 自来水去除余氯后检验结果
colitech试剂colilert试剂
51孔板97孔板51孔板97孔板
1 ND ND ND ND
2 ND ND ND ND
3 ND ND ND ND
4 ND ND ND ND
5 ND ND ND ND
6 2.0 2.0 3.1 1.0
7 16.4 14.8 13.7 16.0
8 7.5 9.8 6.4 8.5
9 11.1 17.5 11.1 13.5
10 42.9 29.9 45.3 35.5
样本序号
表4中，“ND”表示未检出，即检验结果呈全
阴性。
3 讨论
以上试验分别在无菌性，培养基的选择性，检
测结果的一致性，加氯水样的适用性方面对比了国
产colitech和进口colilert酶底物法大肠菌群检测制
品，培养基和实验用器皿的无菌性是微生物检验前
提，两套制品均可达到实验的无菌要求；培养基的
假阳性和假阴性会影响检验结果的准确性，酶底物
法优于多管发酵法的重要原因就是酶和底物的特
异性反应远远比单纯依靠酸碱指示剂的变色和细
菌的产气特性（产酸产气）准确性高，标准菌株试验
证实两种培养基对大肠杆菌类具有选择性；对多种
类型的水样检验结果的一致性进一步验证同为酶
底物法的两种制品对（粪）大肠菌群的定量检测效
果相同；对自来水的试验结果表明：一方面通过加
氯**的自来水无粪大肠菌群检出证实了培养基
无假阳性，另一方面自来水消除余氯后的加标试验
检出，验证了两种培养基对粪大肠菌群检测的具有
相同灵敏性，《生活饮用水卫生标准》对生活饮用水
规定“不得检出”[15]，因此“检出”和“未检出”意义重
大，试验证实两种培养基均可避免出现大肠菌群检
出误报的风险。
国产colitech相对于进口colilert酶底物法大肠菌
群检测制品价格低廉，可降低检测机构的检测成
本，对摆脱依赖进口和酶底物法的推广具有重要意
义。在国家倡导厉行节约的环境下，通过科技研发
形成具有自主知识产权高科技检测制品，可以极大
节约事业型检测机构的公费开支。
参考文献
[1]孙宗科,吴榕.水中大肠菌群快速检测方法-酶底物法和多管发酵
法的比较[J].卫生研究,2006,35(4):497~498.
[2]段玉林,张少梅,温韬,等.酶底物法快速测定地表水中粪大肠菌群
[J].环境研究与监测,2011,24（4）:37~38.
[3]赵春霞,厉以强.酶底物法检测地表水粪便污染的适用性探讨[J].环
境监测监控与预警,2009,1（2）:25~27.
[4]高瑞坤,汤琳,付强.水中粪大肠菌群快速检测方法-固定底物酶底
物法与多管发酵法的比较[J].中国环境监测，2008，24(4):39~41.
[5]赵春霞,张哲海,厉以强,等.酶底物法与多管发酵法和纸片法监测
环境水样大肠菌群的比较[J].环境监测管理与技术，2009,21（2）:
63~64.
[6]王菊,潘孝楼,吴丽.酶底物法和多管发酵法测定水中大肠菌群的比
较[J].中国热带医学,2010,10(9): 1141~1142.
[7]蒋荣荣,金焰.两种方法检测水中粪大肠菌群的比较[J]. 黑龙江环
境通报,2010,34(4):46~47.
[8]马原,刘虹.几种粪大肠菌群检测方法的比较[J]. 黑龙江环境通报,
2010,34(3):43~45.
[9]曾嵘,王博,陈红宇.王妍固定底物酶底物法替代多管发酵法测定粪
大肠菌群的可行性探讨[D].《第十次国内环境监测学术交流会》会
议论文
[10]张少峰,刘国强,魏春雷.粪大肠菌群检测方法及研究进展[J]. 海洋
通报, 2008,27（3）:102~106.
[11] GB/T 5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法微生物指标[S].
[12]崔松阳,饶欠平,蓝先标.固定底物酶底物法检测粪大肠菌群在生
活污水中的应用推广[J].环境，2009，（z1）:60~61.
[13]国家环境保护总局.水和废水监测分析方法[M].第四版.北京：中国
环境科学出版社,2002.
[14]卢纹岱. SPSS for Windows 统计分析(第三版)[M].北京:电子工业
出版社,2006.
[15]GB/T 5749-2006.生活饮用水卫生标准[S].
生活饮用水标准检验方法、日常生活饮用水标准检验方法、生活饮用水标准检验方法的详细说明
文章来源于西安立科环保科技有限公司